本检测方法源自关于印发全国打击违法添加非食用物质和滥用食品添加剂专项整治抽检工作指导原则和方案的通知。

禽蛋中三聚氰胺的测定

1
原理液态奶样品沉淀蛋白、去除脂肪后,用离子色谱分析,电导检测器检测,外标法定量。

Determination of melamine in eggs

2 实验部分2.1 试剂与材料2.1.1 试验用水均为超纯水2.1.2 乙腈(色谱纯)

2008-12-26发布 2009-01-01实施

2.1.3 固相萃取小柱:OnGuard RP柱(2.5cc),或相当者(如C18),使用前依次用5
ml甲醇和10 ml水活化。

四川省质量技术监督局 发布

2.1.4 硫氰酸标准品:北京化工厂2.1.5
硫氰酸标准储备液将硫氰酸标准品于80度烘箱内烘干2小时。准确称取干燥后的硫氰化钾1.6732g于1000ml容量瓶中,定容,混匀。即得1000ppm硫氰根标准储备液。

目 次

2.1.6 硫氰酸标准中间液取硫氰酸标准储备溶液 1 mL,置于100
mL容量瓶中,加水至刻度。此溶液含硫氰酸10 mg/L。

前言

2.1.7 硫氰酸标准使用液移取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0
mL硫氰酸标准中间液,用水定容于10
mL容量瓶中,浓度分别为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/L。

1 范围

2.2 仪器2.2.1 离子色谱仪:配备淋洗液发生器和电导检测器;2.2.2
离心机:冷冻离心机。

2 规范性引用文件

2.3
样品处理取4mL液体奶样品,加入5mL乙腈沉淀蛋白,取上清液稀释10倍,过RP柱(或经冷冻离心机)去除脂肪后上机。

3 方法1:高效液相色谱法

2.4 离子色谱参考条件色谱柱:强亲水性阴离子交换柱。IonPac
AS16,4.0×250mm分析柱;IonPac AG16,4.0×50mm保护柱;或其他相当者。

4 方法2:气相色谱质谱法

流动相:KOH溶液,梯度淋洗。淋洗液由淋洗液在线发生器在线产生。

附录A (资料性附录)

流速:1.0
mL/min;抑制器:ASRS-300型抑制器,4mm;抑制器抑制模式:外接水模式,抑制电流175mA;柱温:30℃;进样体积:100
μL。

前 言

3 结果计算X= c*9*10/4 …………………………(1)

本标准的附录A为资料性附录。

式中:X——液态奶中硫氰酸的含量,单位为微克每毫升(μg/mL);c——由标准曲线得到试样溶液中硫氰酸的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);9——液态奶的体积与乙腈体积之和,单位为毫升(mL);4——液态奶的体积,单位为毫升(mL);10——稀释倍数;计算结果保留两位有效数字。

本标准按GB/T.1.1-2000《标准的结构和编写规则》和GB/T.1.2-2002《标准中规范性技术要素内容的确定方法》要求进行编制。

4
精密度在重复性条件下,获得的硫氰酸的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的5%。

本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。

本标准由四川省质量技术监督局批准。

本标准由四川省畜产品安全检测中心负责起草。

本标准起草人:廖峰﹑赵立军﹑李云﹑高庆军﹑林顺全﹑张静。

禽蛋中三聚氰胺的测定

1 范围

本标准规定了测定禽蛋中三聚氰胺的含量的高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱质谱联用法(GC-MS),其中GC-MS法为确证法。

本标准适用于禽蛋中三聚氰胺的测定。

本标准中HPLC法最低定量限为2.0 mg/kg,GC-MS法最低定量限为0.05 mg/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。

GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 方法1:高效液相色谱法

3.1 原理

取适量禽蛋,将蛋清和蛋黄搅拌匀浆后用三氯乙酸和醋酸铅溶液提取,提取液离心后经混合型阳离子交换固相萃取柱净化,洗脱物吹干后用甲醇溶液溶解,用高效液相色谱仪进行测定。

3.2 试剂与材料

除非另有规定,仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682的三级水,色谱用水符合GB/T6682一级水的规定。

3.2.1 甲醇:色谱纯。

3.2.2 乙腈:色谱纯。

3.2.3 氨水:浓度25%~28%。

3.2.4 混合型阳离子交换固相萃取柱:60mg,3mL。

3.2.5 三氯乙酸溶液10g/L:称取10g三氯乙酸加水至1000mL。

3.2.6 氨水甲醇溶液:量取5mL氨水,溶解于95mL甲醇中。

3.2.7 乙酸铅溶液22g/L:取22g乙酸铅用约300mL水溶解后定容至1L。

3.2.8 滤膜:0.45μm,有机相。

3.2.9 甲醇溶液:200mL甲醇(3.2.1)加入800mL一级水,混匀。

3.2.10
流动相:称取2.16g辛烷磺酸钠和2.10g柠檬酸于1L容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度。取该溶液900mL加入100mL乙腈(3.2.2)。

3.2.11 三聚氰胺标准品(纯度>99%)。

3.2.12 三聚氰胺标准溶液

3.2.12.1
标准储备液:称取100mg(精确到0.1mg)的三聚氰胺标准品,用甲醇溶液(3.2.9)溶解并定容于100mL容量瓶中,该溶液浓度为1mg/mL,于4℃冰箱内贮存,有效期3个月。

3.2.12.2
标准中间液:吸取标准储备液5.00mL,于50mL容量瓶内,用甲醇溶液(3.2.9)定容至50mL,该溶液三聚氰胺浓度为100μg/mL,于4℃冰箱内贮存,有效期1个月。

3.2.12.3
标准工作液:用移液管分别移取标准中间液2mL、5mL、10mL、15mL、20mL于5个100mL容量瓶内,用甲醇溶液(3.2.9)定容,该溶液三聚氰胺浓度为2.0μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL。于4℃冰箱内贮存,有效期1周。

3.3 仪器与设备

3.3.1 高效液相色谱仪,配有二极管阵列检测器或紫外检测器。

3.3.2 离心机:10000r/min。

3.3.3 涡旋混合器。

3.3.4 超声波清洗器。

3.3.5 氮吹仪,可控温至60℃。

3.3.6 固相萃取装置。

3.3.7 高速匀质器。

3.3.8 震荡摇床。

3.3.9 带盖塑料离心管:50mL。

3.4 试料的制备

——取匀浆后的供试样品,作为供试材料;

——取匀浆后的空白样品,作为空白材料;

——取匀浆后的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。

3.5 测定步骤

3.5.1 提取

称取5.00g试样(精确至0.01g)
于带盖塑料离心管(3.3.9)中,准确加入28mL三氯乙酸溶液(3.2.5),加入2mL乙酸铅溶液(3.2.7)。摇匀,超声提取20min。在10000r/min离心机上离心10min,上清液备用。

3.5.2 净化

分别用3mL甲醇,3mL水活化混合型阳离子交换固相萃取柱,准确移取6mL离心液分次上柱,控制过柱速度在1mL/min以内。再用3mL水和3mL甲醇洗涤混合型阳离子交换固相萃取柱,抽近干后用氨水甲醇溶液(3.2.6)5mL洗脱。洗脱液50℃氮气吹干,准确加入1.00mL甲醇溶液(3.2.9),涡旋振荡1min,过0.45μm滤膜,上机测定。

3.5.3 液相色谱条件

色谱柱:C18柱,柱长150mm,内径4.6mm,粒度5μm;或性能相当的色谱柱。

柱温:室温。

流动相流速:1.0mL/min。

检测波长:240nm。

3.5.4 测定

按照保留时间进行定性,试样与标准品保留时间的相对偏差不大于2%,单点或多点校正外标法定量。待测样液中三聚氰胺的响应值应在工作曲线范围内。

3.6 结果计算和表述

3.6.1
试样中三聚氰胺的含量X,以质量分数毫克每千克(mg/kg)表示,单点校正按式(1)计算:

图片 1…………………………………………………(1)

式中:

V——净化后加入的甲醇溶液体积,单位为毫升(mL);

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